1、根據(jù)待測細(xì)菌懸浮液的濃度,加入無菌水進(jìn)行適當(dāng)稀釋,并計算每個細(xì)胞的細(xì)菌數(shù)量。
2、取一個干凈的血細(xì)胞計數(shù)板,用蓋玻片蓋住計數(shù)區(qū)域。
3、搖動細(xì)菌懸浮液,用滴管吸一點,從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的凹槽中沿蓋玻璃的下邊緣滴一小滴,讓細(xì)菌懸浮液利用液體的表面張力填充計數(shù)區(qū)域,不要產(chǎn)生氣泡,并使用吸水紙從凹槽中吸收過量的細(xì)菌懸浮液。細(xì)菌懸浮液也可以直接滴到計數(shù)區(qū)上,然后覆蓋玻璃蓋。
4、讓它靜置一段時間,這樣細(xì)胞就會沉淀在計數(shù)板上,不再隨液體漂移。將血細(xì)胞計數(shù)板放在顯微鏡臺上并夾緊。首先在低倍顯微鏡下找到計數(shù)區(qū)域,然后切換到高倍顯微鏡進(jìn)行觀察和計數(shù)。由于活細(xì)胞的折射率與水的折射率相似,因此在觀察過程中應(yīng)降低光的強度。
5、計數(shù)時,如果計數(shù)區(qū)域由16個中間正方形組成,則按照對角線方向在左上、左下、右上和右下的4個中間正方形中計數(shù)細(xì)菌數(shù)量。如果是由25個中間正方形組成的計數(shù)區(qū),除了上述四個中文邊外,還需要計算中心一個中間正方形的細(xì)菌數(shù)量。為了確保計數(shù)的準(zhǔn)確性,避免重復(fù)計數(shù)和遺漏,計數(shù)期間應(yīng)對網(wǎng)格線上沉降的細(xì)胞的統(tǒng)計有統(tǒng)一的規(guī)定。
6、對于芽接酵母,當(dāng)芽達(dá)到母細(xì)胞的一半大小時,可以算作兩個細(xì)胞。對每個樣品重復(fù)計數(shù)2-3次,并根據(jù)公式計算每毫升(g)細(xì)菌懸浮液的細(xì)胞數(shù)。
7、測量后,取下蓋玻片,用水清洗血細(xì)胞計數(shù)板。不要用硬物清洗或擦拭,以免損壞格柵秤。洗完后,自己或用吹風(fēng)機(jī)擦干,然后放在盒子里存放。